We are searching data for your request:
Upon completion, a link will appear to access the found materials.
Mierzę poziomy genu x po transfekcji komórek plazmidem i chcę porównać je z poziomami w komórkach transfekowanych próbnie. Przeprowadziłem trzy różne eksperymenty z transfekcją, w różnych dniach (trzy powtórzenia biologiczne). Następnie określam ilościowo ekspresję za pomocą RT-qPCR.
Jak mogę połączyć dane z trzech biologicznych replikacji? Stosowałem metodę ∆∆Ct do każdego biologicznego powtórzenia osobno, a następnie łączyłem i analizowałem ostateczną zmianę krotności trzech powtórzeń w jednokierunkowej anovie, z testem indyka do obliczania istotności.
Mój przełożony zasugerował inną strategię: obliczyć wartości ∆Ct (mutant Ct - Ct porządkowe) trzech biologicznych replikacji, a następnie obliczyć różnicę (∆∆Ct) każdego ∆Ct ze średnią ∆Ct komórek transfekowanych pozornie ( ∆Ct(transfekowane komórki; powtórzenie nr x) - ∆Ct(próba; średnia powtórzeń)). Następnie oblicz 2^(-∆∆Ct) każdego otrzymanego ∆∆Ct.
W obu przypadkach uzyskuje się na końcu trzykrotne wartości zmian (po jednej dla każdego powtórzenia biologicznego). Jednak w drugiej metodzie wariancja jest znacznie większa i np. nie ma znaczącej różnicy (jednokierunkowa anova, test indyka), podczas gdy istotność osiąga się w pierwszej metodzie.
Moje pytanie brzmi: która metoda jest najlepsza? I być może dlaczego?
p.s. Naprawdę mam nadzieję, że wyraziłem się jasno, nie jest łatwo wytłumaczyć słowami, co mam na myśli. Proszę powiedz mi, czy nie możesz zrozumieć niektórych części pytania.
Cudowna, bardzo cenna odpowiedź
Przepraszam, ale moim zdaniem nie masz racji. Mogę to udowodnić. Napisz do mnie w PM, będziemy się komunikować.
Dobrze, że poświęcasz tyle czasu na swoją witrynę.
Usunąłem to pytanie
In fundamentally incorrect information
Co za ciekawy temat