Informacja

Jaki jest najlepszy sposób łączenia biologicznych replikacji w analizie ekspresji genów qPCR? (2^(-∆∆Ct) metoda; jednokierunkowa anowa, test indyka)

Jaki jest najlepszy sposób łączenia biologicznych replikacji w analizie ekspresji genów qPCR? (2^(-∆∆Ct) metoda; jednokierunkowa anowa, test indyka)


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Mierzę poziomy genu x po transfekcji komórek plazmidem i chcę porównać je z poziomami w komórkach transfekowanych próbnie. Przeprowadziłem trzy różne eksperymenty z transfekcją, w różnych dniach (trzy powtórzenia biologiczne). Następnie określam ilościowo ekspresję za pomocą RT-qPCR.

Jak mogę połączyć dane z trzech biologicznych replikacji? Stosowałem metodę ∆∆Ct do każdego biologicznego powtórzenia osobno, a następnie łączyłem i analizowałem ostateczną zmianę krotności trzech powtórzeń w jednokierunkowej anovie, z testem indyka do obliczania istotności.

Mój przełożony zasugerował inną strategię: obliczyć wartości ∆Ct (mutant Ct - Ct porządkowe) trzech biologicznych replikacji, a następnie obliczyć różnicę (∆∆Ct) każdego ∆Ct ze średnią ∆Ct komórek transfekowanych pozornie ( ∆Ct(transfekowane komórki; powtórzenie nr x) - ∆Ct(próba; średnia powtórzeń)). Następnie oblicz 2^(-∆∆Ct) każdego otrzymanego ∆∆Ct.

W obu przypadkach uzyskuje się na końcu trzykrotne wartości zmian (po jednej dla każdego powtórzenia biologicznego). Jednak w drugiej metodzie wariancja jest znacznie większa i np. nie ma znaczącej różnicy (jednokierunkowa anova, test indyka), podczas gdy istotność osiąga się w pierwszej metodzie.

Moje pytanie brzmi: która metoda jest najlepsza? I być może dlaczego?

p.s. Naprawdę mam nadzieję, że wyraziłem się jasno, nie jest łatwo wytłumaczyć słowami, co mam na myśli. Proszę powiedz mi, czy nie możesz zrozumieć niektórych części pytania.


Obejrzyj wideo: Multiplex PCR (Czerwiec 2022).


Uwagi:

  1. Daire

    Cudowna, bardzo cenna odpowiedź

  2. Luxman

    Przepraszam, ale moim zdaniem nie masz racji. Mogę to udowodnić. Napisz do mnie w PM, będziemy się komunikować.

  3. Jorden

    Dobrze, że poświęcasz tyle czasu na swoją witrynę.

  4. Zolom

    Usunąłem to pytanie

  5. Verge

    In fundamentally incorrect information

  6. Daikinos

    Co za ciekawy temat



Napisać wiadomość